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DNA提取与纯化回收常见问题及解决方案
 

未回收或回收率低

胶块未全部溶解: 一般情况下,加入足量溶胶液后,琼脂糖凝胶在室温下就可以溶解; 如果室温下溶解凝胶速度慢,或不能溶胶时,应置于55℃水浴,不断上下颠倒,确定胶块完全溶解后再进行下一步骤。

胶块太大(>400 mg:  如果需要处理的胶块太大,可多做几次回收或选用大量型回收试剂盒。

溶胶液有结晶盐析出:在室温较低时(如冬天),或将溶胶液放置于4 ℃冰箱,都有可能使溶胶液有结晶盐析出,从而使溶胶液的离子强度下降,导致核酸不能够与硅基质膜结合,影响DNA片段的回收率。

电泳缓冲液PH值太高:  硅基质材料在高盐及低PH值(PH7.5)时可结合DNA,在低盐及高PH值(PH8)条件下洗脱。如果电泳缓冲液PH值太高,会导致DNA无法结合或降低结合率。可在溶胶后加入10ul NaAcpH5.0)调节。

漂洗液中未加入无水乙醇: 第一次使用前应在漂洗缓冲液中加入无水乙醇。漂洗缓冲液每次用后应拧紧瓶盖。

未使用洗脱缓冲液: 洗脱时应使用试剂盒提供的洗脱缓冲液,如果使用其它缓冲液或水,应使PH值为8以上。使用灭菌H20洗脱柱子,回收率会大大下降。

洗脱缓冲液未加在离心柱中间:  尤其使用较少量洗脱缓冲液时,应加在离心柱正中间,并放置1-2分钟,再离心。

 

回收后的片段无法用于后续实验,如连接等。

洗出液中含酒精, 漂洗液漂洗后再次离心,尽量去除多余溶液。离心后可再放置1-2分钟晾干离心柱。

洗出液中污染有琼脂糖,凝胶未全部溶解或胶块太大(>400 mg)。

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